25-OH Vitamin D2/D3

Vitamin D spielt eine entscheidende Rolle im Calcium- und Phosphatmetabolismus. Es wird durch eine photolytische Spaltung mittels UV-Licht aus 7-Dehydrocholesterol gebildet. Das so gebildete Provitamin D3 isomerisiert spontan zu Vitamin D3. In einer Hydroxylierungsreaktion in der Leber wird das 25-OH Vitamin D3 gebildet. In der Niere entsteht dann das stoffwechselaktive 1,25 (OH)2 Dihydroxyvitamin D3.

Ein Vitamin D Mangel in der Kindheit manifestiert sich als Rhachitis. Hierbei kommt es zu einer unvollständigen Kalzifizierung von Knorpel und Knochen. Daniel Webster beschrieb die Krankheit bereits 1645. Die englischen Kinder der damaligen Zeit litten unter einer Unterversorgung von Vitamin D und einem Mangel an Sonnenlicht während vieler Monate im Jahr. Die Einführung von Lebertran als Ergänzung zur normalen Diät verbesserte die Versorgung deutlich.

In Erwachsenen führt ein Vitamin D Mangel zum Krankheitsbild der Osteomalazie. Durch den reduzierten Vitamin D Spiegel im Blut wird Calcium aus den Knochen freigesetzt. Hierbei wird die Stabilität der Knochen deutlich reduziert. Arabische Frauen, die sich total verhüllt kleiden und somit keinem direkten Sonnenlicht ausgesetzt sind, zeigen vielfach das Krankheitsbild der Osteomalazie.
Vor diesem Hintergrund erscheint es als äußerst wichtig, besonders in den Wintermonaten Vitamin D zu messen und gegebenenfalls zuzuführen.

Prinzip der Methode

Bei der äußerst einfachen Probenvorbereitung wird ein Fällungsschritt mit einer Extraktion kombiniert. Nach der Zetrifugation wird die obere Phase abgenommen und in das HPLC-System injiziert.

Die Trennung mittels HPLC erfolgt isokratisch bei 30 °C auf einer „reversed phase“ Säule. Sie benötigt ca. 12 Minuten für einen Lauf. Die Chromatogramme werden mit einem UV-Detektor aufgezeichnet. Die Quantifizierung erfolgt über den mitgelieferten Serum-Kalibrator und die Berechnung der Ergebnisse wird über die „interne Standard-Methode“ durchgeführt.